組織學研究方法-組織化學﹝histochemistry﹞和細胞化學術﹝cyto-chemistry_technique﹞:

組織化學﹝histochemistry﹞和細胞化學﹝cytochemistry﹞技術是通過化學或物理反應原理顯示組織切片﹝tissue_section﹞細胞內某種化學成分,進行定位、定量及其與功能相關的研究。

 如糖類、脂類、酶、核酸等與試劑發生化學物理反應,形成有色終末產物,在光鏡下觀察,有的可在電鏡下觀察。

01、糖類:

 顯示多糖和蛋白多糖的常用方法是過碘酸-雪夫反應﹝periodic_acid_Schiff_reaction,PAS反應﹞。

 基本原理是過碘酸的氧化作用先使糖分子的乙二醇基變為乙二醛基,後者繼而與Schiff試劑(無色亞硫酸品紅複合物)結合,形成紫紅色反應產物。

 顏色反應的深淺取決於組織內多糖的乙二醇分子的多寡。

02、脂類:脂類物質包括脂肪和類脂。

 標本用甲醛固定,冷凍切片﹝frozen_section﹞,脂類保存較好。

 多用蘇丹染料、油紅O、尼祿藍等溶於脂類的染料染色,使脂質呈色。

 也可用四氧化鋨﹝OSO4﹞染色,脂肪酸或膽鹼可使OSO4還原為OSO2而呈黑色。

03、酶:細胞內的酶種類甚多,有氧化還原酶、水解酶、合成酶、轉移酶等幾類,目前已有100多種酶組織化學﹝histochemistry﹞染色法。

 酶組化反應的基本原理是利用酶對其相應底物的水解、氧化等作用,然後再使底物的反應產物與某種捕獲劑發生反應,形成沉澱或有色的最終產物,借此檢測該酶在組織切片﹝tissue_section﹞或細胞內的分佈及活性強弱。

 如細胞的磷酸酶是一種重要的水解酶,鹼性磷酸酶﹝ALP﹞和酸性磷酸酶﹝ACP﹞在合適的pH條件下可水解有機磷酸脂。

 小腸上皮細胞﹝myoepithelial_cell﹞表面的紋狀緣﹝straited_border﹞和腎近曲小管表面的刷狀緣﹝brush_border﹞處,微絨毛﹝microvillus﹞含有豐富的ALP,與物質的吸收和轉運功能相關;許多細胞的溶酶體內則含大量ACP,參與細胞內物質代謝。

 這兩種酶均可以β-甘油磷酸鈉為底物,底物被水解產生磷酸根,再以Ca2+、Co2+(顯示ALP)或Pb2+(顯示ACP)捕獲磷酸根,最後用硫化銨處理,即形成硫化鈷或硫化鉛黑色最終產物,出現在組織切片﹝tissue_section﹞中該酶存在的部位。

 因此,酶組化染色不是酶本身的直接顯色,而是酶作用底物的化學反應產物顯色的。

04核酸

 顯示DNA的傳統方法是Feulgen反應,切片先用稀鹽酸處理,使DNA分子中去氧核糖與嘌呤之間的連接鍵打開,形成醛基,再與Schiff試劑作用,原理同PAS反應,使細胞核DNA顯紫紅色。

 還可用甲基綠-焦寧染色法同時顯示DNA和RNA,這兩種染料都是鹼性,甲基綠使細胞核內的DNA呈藍綠色,焦寧使細胞質和核仁內的RNA呈紅色。

 

經筋醫理探源(永康堂‧張老師)

 

永康堂【YCT】~學習自測~

答案

核酸

【B】

喹諾酮類抗生素的抗菌作用機制主要是:※※A、干擾細菌細胞壁的合成;※※B、損傷細胞膜;※※C、影響細菌蛋白質的合成;※※D、抑制細菌核酸的合成。(醫院感染)

【C】

氨基糖甙類抗生素的抗菌作用機制主要是:※※A、干擾細菌細胞壁的合成;※※B、損傷細胞膜;※※C、影響細菌蛋白質的合成;※※D、抑制細菌核酸的合成。(醫院感染)

【B】

抗真菌類藥物的抗菌作用機制主要是:※※A、干擾細菌細胞壁的合成;※※B、損傷細胞膜;※※C、影響細菌蛋白質的合成;※※D、抑制細菌核酸的合成。(醫院感染)

【A】

β-內醯胺類(青黴素、頭孢類)抗生素的作用機制主要是:※※A、干擾細菌細胞壁的合成;※※B、損傷細胞膜;※※C、影響細菌蛋白質的合成;※※D、抑制細菌核酸的合成。(醫院感染)

【A】

甲氨蝶呤的作用機理:※※A、減少四氫葉酸生成而抑制蛋白質的合成;※※B、作用於核糖體而抑制蛋白質的合成;※※C、抑制DNA多聚酶;※※D、損害細胞膜而致細胞毒作用;※※E、與嘌呤或嘧啶競爭而抑制核酸合成。(藥理)

【A】

甲氧苄啶的抗菌機理是:※※A、抗葉酸代謝;※※B、抑制細菌細胞壁合成;※※C、影響胞質膜的通透性;※※D、抑制細菌蛋白質合成;※※E、抑制細菌核酸代謝。(藥理)

【E】

下列哪類抗腫瘤藥主要通過干擾核酸生物合成發揮作用:※※A、亞硝脲類;※※B、抗癌抗生素;※※C、烷化劑;※※D、喜樹鹼類;※※E、抗代謝藥。(藥理)

【E】

巰嘌呤的作用機理:※※A、減少四氫葉酸生成而抑制蛋白質的合成;※※B、作用於核糖體而抑制蛋白質的合成;※※C、抑制DNA多聚酶;※※D、損害細胞膜而致細胞毒作用;※※E、與嘌呤或嘧啶競爭而抑制核酸合成。(藥理)

【C】

多黏菌素的抗菌機理是:※※A、抗葉酸代謝;※※B、抑制細菌細胞壁合成;※※C、影響胞質膜的通透性;※※D、抑制細菌蛋白質合成;※※E、抑制細菌核酸代謝。(藥理)

【C】

阿糖胞苷的作用機理:※※A、減少四氫葉酸生成而抑制蛋白質的合成;※※B、作用於核糖體而抑制蛋白質的合成;※※C、抑制DNA多聚酶;※※D、損害細胞膜而致細胞毒作用;※※E、與嘌呤或嘧啶競爭而抑制核酸合成。(藥理)

【E】

喹諾酮類藥的抗菌機理是:※※A、抗葉酸代謝;※※B、抑制細菌細胞壁合成;※※C、影響胞質膜的通透性;※※D、抑制細菌蛋白質合成;※※E、抑制細菌核酸代謝。(藥理)

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