型、色、體、徵(永康堂‧張老師)

　組織學研究方法-原位雜交術﹝in_situ_hybridization﹞：

原位雜交術﹝in_situ_hybridization﹞是一種核酸分子雜交技術，它是通過檢測細胞內mRNA和DNA序列片段，原位研究細胞合成某種多肽或蛋白質的基因表達。

　其基本原理是根據兩條單鏈核苷酸互補鹼基序列專一配對的特點，應用已知鹼基序列並具有標記物的RNA或DNA片段即核酸探針﹝probe﹞，與組織切片﹝tissue_section﹞或細胞內的待測核酸（RNA或DNA片段）進行雜交，通過標記物的顯示，在光鏡或電鏡下觀察目的mRNA或DNA的存在與定位。

此項技術需首先製備某種核酸探針﹝probe﹞，其種類主要有三種：

①利用大肝桿菌重組帶有目的基因的質粒DNA，製成互補DNA探針（cDNA）；

②應用限制性核酸內切酶消化製成線性DNA範本，在體外轉錄獲得反意RNA探針（cDNA）；

③依照待測核酸的核苷酸序列，應用DNA合成儀合成寡聚核苷酸探針。

　cRNA和cDNA的常用標記物有32S、32P、3H等放射性核素和螢光素、生物素﹝biotin﹞、地高辛等非放射性物質。

　組織學﹝histology﹞應用的原位雜交術﹝in_situ_hybridization﹞主要是染色體原位雜交和細胞原位雜交。

　前者是研究遺傳基因、抗原基因、受體基因、癌基因等在染色體上的定位與表達；後者是研究細胞某種蛋白質的基因轉錄物mRNA在胞質內的定位與表達。

　核酸分子雜交術有很高的敏感性和特異性，它是免疫細胞化學﹝immunocytochemistry﹞的基礎上，進一步從分子水準探討細胞功能的表達及其調節機制的，已成為當前細胞生物學、分子生物學研究的重要手段。

【Ａ】

胰島素基因定位，採用的方法主要是：※※Ａ、原位雜交﹝in_situ_hybridization﹞；※※Ｂ、體細胞雜交；※※Ｃ、染色體畸變法；※※Ｄ、連鎖分析法；※※Ｅ、比較製圖法。《遺傳學》