型、色、體、徵(永康堂‧張老師)

　組織學研究方法-電子顯微鏡術：

01、透射電鏡術﹝transmission_electron_microscope，TEM﹞：

　透射電鏡﹝TEM﹞是以電子束穿透樣品（組織的超薄切片），經聚合放大後，顯像於螢光屏上進行觀察和攝片的。

　電鏡的放大倍數的解析度比光鏡大得多，放大倍數為幾萬至幾十萬倍，解析度可達0.2nm。

　標本製備較光鏡的更嚴格，新鮮組織切成小塊（lmm3），用戊二醛，多聚甲醛、四氧化鋨﹝OSO4﹞等固定，樹脂包埋﹝embedding﹞，以超薄切片機﹝microtome﹞切成厚50～80nm的超薄切片，經醋酸鈾和檸檬酸﹝citric_acid﹞鉛等重金屬電子染色後，置於電鏡下觀察，標本在螢光屏上呈黑白反差的結構影像。

　被重金屬浸染呈黑色的結構，稱電子密度高﹝electron-dense﹞；反之，淺染的部分稱電子密度低﹝electron-lucent﹞，這種染色稱正染色﹝positive_staining﹞。

　若被染結構著色淺淡，而其周圍部分染成黑，是稱為負染色﹝negative_staining﹞。

　透射電鏡﹝TEM﹞的電子槍加速電壓50～100kV，電子束穿透力低，近年製成加速電壓500kV以上的超高壓電鏡，電子束穿透力很強，可觀察0.5～10μm厚的切片，可觀察細胞內骨架等的立體超微結構。

　應用電鏡觀察細胞化學﹝cytochemistry﹞染色標本，稱電鏡細胞化學術﹝cyto-chemistry_technique﹞；電鏡觀察免疫細胞化學﹝immunocytochemistry﹞染色標本，稱免疫電鏡術﹝immunoelectron_microscopy﹞；電鏡與放射自顯影結合的方法稱電鏡放射自顯影術﹝electron_microscopeautoradiography﹞。

02、掃描電鏡術﹝SEM﹞：

　掃描電鏡﹝scanning_electron_microscope，SEM﹞是用於觀察組織表面的立體結構的。

　組織塊經固定後，置於真空鍍膜儀內於燥，在標本表面先後噴鍍一層碳膜和合金膜，即可置於鏡下觀察。

　掃描電鏡﹝SEM﹞的景深長，樣品表面的金屬膜可提高其導電性和圖像反差，在螢光屏上掃描成像，呈現富有立體感的表面圖像，如細胞表面的突起、微絨毛﹝microvillus﹞、纖毛﹝cilium﹞及細胞的分泌與吞噬行為等。

03、冷凍蝕刻複型術﹝tfeeze_etch_replica﹞和冷凍割斷術﹝freeze_cracking﹞：

冷凍蝕刻複型術﹝tfeeze_etch_replica﹞：

　是在透射電鏡﹝TEM﹞下觀察組織或細胞斷裂面的金屬複製膜，顯示細胞微細結構的立體影像。

　組織塊先經甘油生理鹽水處理（防止形成冰晶）後投入液氮快速冷凍，在低溫下用鋼刀將樣品劈開，形成凹凸不平的斷裂面：-100℃真空下使斷裂面的冰晶昇華，暴露不平整表面；在斷裂面上先後噴鍍一層合金膜和碳膜，用次氯酸等組織腐蝕掉；將反差的凸凹不平的金屬複型膜置於鏡下觀察。

　此項技術尤適用研究生物膜的內部結構，如從單位膜的脂質分子疏水端劈開，經蝕刻鍍膜，鏡下可見質膜斷裂面複型膜結構狀態，其凹凸影像恰與實物相反。

冷凍割斷術﹝freeze_cracking﹞：

　是將固定組織包埋﹝embedding﹞在樹脂內，低溫下割斷，斷面噴鍍合金，在掃描電鏡﹝SEM﹞下觀察斷面的立體構型。

　該技術適於研究組織內部微細結構的相互關係，如肝細胞與肝血竇和膽小管的關係，腎小體的腎小囊與血管球的關係等。

04、電鏡X-射線顯微分析術﹝X-ray_microanalysis﹞：

　X-射線顯微分析術﹝X-ray_microanalysis﹞是研究細胞和組織內元素的種類、分佈和含量的新技術。

　它是利用高速電子束轟擊電鏡內生物標本的微小區域，使該區所含的元素發射了一定波長的X－射線，通過檢測器對X－射線進行波譜或能譜分析，即可測定微區內元素的性質、含量和分佈。

　如測定細胞內Na、K、Ca、Fe、P、Cl等及某些微量元素的含量和分佈變化，探討各種元素與細胞生理和病理的關係。