組織學研究方法:

 一般光學顯微鏡術:

應用一般光學顯微鏡(簡稱光鏡)觀察組織切片﹝tissue_section﹞是組織學﹝histology﹞研究的最基本方法。

 取動物或人體的新鮮組織塊,先用固定劑﹝fixative﹞固定﹝fixation﹞,使組織中的蛋白質迅速凝固,防止細胞自溶和組織腐敗。

 常用的固定劑﹝fixative﹞如灑精、甲醛、醋酸、苦味酸、四氧化鋨﹝OSO4﹞等,一般常將幾種固定劑﹝fixative﹞配製成混合固定液,以抵消或減弱單種固定劑﹝fixative﹞對組織的收縮或膨脹等缺點,達到更好固定效果。

 固定後的組織塊(約3~5mm3大小)用石蠟、火棉膠或樹脂等包埋﹝embedding﹞成硬塊,以切片機﹝microtome﹞切成5~10μm厚的組織切片﹝tissue_section﹞,切片貼在載玻片上經脫蠟等步驟後進行染色。

 組織塊也可立即投入液氮(-196℃)內快速凍結,用恒冷箱切片機﹝cryostat﹞製成冷凍切片﹝frozen_section﹞,這種方法製片迅速,細胞內酶活性保存較好,常用於酶組織化學﹝histochemistry﹞染色。

 血細胞﹝blood_cell﹞和分離培養的細胞可直接塗在玻片上,製成塗片﹝smear﹞。

 疏鬆結締組織﹝loose_connectivetissue﹞和腸系膜等軟組織可撕成薄片鋪在玻片上(鋪片),牙和骨等堅硬組織可磨成薄片(磨片)。

 組織切片﹝tissue_section﹞等標本經染色、透明後,以封固劑和蓋片封固,即可長期保存,鏡下觀察。

染色(staining):是用染料使組織切片﹝tissue_section﹞著色,便於鏡下觀察。

 天然和人工合成的染料甚多,它們都是含發色團的有機化合物,當染料具有助色團成為鹽類物質,即可溶解于水並具電荷,與組織有親合力,使組織著色。

 含氨基(-NH2)、二甲氨基(-N(CH3)2〕等鹼性助色團的染料,稱鹼性染料(basic_dye),它的鹽溶液具陽電荷;含羧基(-COOH)、羥基(-OH)或磺基(-SO3H)等酸性助色團的染料,稱酸性染料﹝acid_dye﹞,它的溶液具陰電荷。

 組織的染色原理一般認為基於化學結合或物理吸附作用。

 細胞和組織的酸性物質或結構與鹼性染料親合力強者,稱嗜鹼性﹝basophilia﹞;而鹼性物質或結構與酸性染料﹝acid_dye﹞親合力強者,稱嗜酸性﹝acidophilia﹞;若與兩種染料的親合力均不強者,稱中性﹝neutrophilia﹞。

 組織的基本成分是蛋白質,構成蛋白質的氨基酸常是即有含氨基的,也有含羧基的,是兩性電解質。

 各種蛋白質的等電點因氨基酸成分的不同而異,其電荷性質又與溶液的pH值相關,根據研究目的選用合適的染色方法,調整好染液的pH值,即可取得良好染色效果。

 常用的酸性染料﹝acid_dye﹞如伊紅﹝eosin﹞、堅牢綠、橙黃G等,鹼性染料如蘇木精﹝hematoxylin﹞、亞甲藍、鹼性品紅等。

 組織學﹝histology﹞中最常用的是蘇木精﹝hematoxylin﹞和伊紅﹝eosin﹞染色法,簡稱HE染色法。

 蘇木精﹝hematoxylin﹞使細胞核和胞質內的嗜鹼性﹝basophilia﹞物質著藍紫色,伊紅﹝eosin﹞使細胞質基質和間質內的膠原纖維﹝collagenousfiber﹞等著紅色。

物理吸附作用的染色方法,如用蘇丹染料顯示脂肪組織﹝adipose_tissue﹞,染料溶於脂肪內,使細胞內的脂滴顯色。

 又如用硝酸銀、氯化金等重金屬鹽顯示細胞和組織的某些結構,則是使金屬微粒附著在結構表面而呈棕黑色或棕黃色。

 銀染法中有些組織結構可直接使硝酸銀還原而顯示,稱此為親銀性﹝argentaffin﹞;有些結構無直接還原作用,需加入還原劑方能顯色,則稱為嗜銀性﹝argyrophilia﹞。

 還有些組織成分如結締組織﹝connective_tissue﹞和軟骨﹝cartilage﹞基質中的糖氨多糖,當用甲苯胺藍﹝toluidine_blue﹞等鹼性染料染色後呈紫紅色,這種現象稱為異染性﹝metachromasia﹞,其原理可能是該染料在溶液中呈單體狀態時顯藍色,當它與多陰離子的高分子物質耦合後,染料分子聚合成多聚體而顯紅色。

 還有些染色方法的原理至今還不清楚。

 

經筋醫理探源(永康堂‧張老師)

 

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答案

光學顯微鏡

【C】

光學顯微鏡所觀察到的尼氏體是:;※※A、高爾基氏體;※※B、粒線體;※※C、顆粒性內質網;※※D、核糖體。(《解剖學》)

 

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答案

組織切片

【A】

某年輕女病人,自訴左側乳房有硬結,到某醫院外科診治。經活體組織檢查證實為乳腺癌。經病人及其家屬同意後,收住院進行乳腺癌根治術。在術中右側乳房也作了活體組織切片,檢查結果為「乳腺瘤性腫瘤,伴有腺體增生」。雖然目前不是癌組織,但是將來霄癌變的可能性,醫師決定將右側乳房切除。術後病人及其家屬認為,醫師未經病人或其家屬同意切除右側乳房,要求追究醫師的責任並要求賠償。上述病例從倫理學上分析,正確的有:※※A、該醫師未經病人及其家屬同意,自選切除病人右側乳房,損害了病人的知情同意權;※※B、該醫師為了防止右側乳房癌變。(醫學倫理學)

【C】

下列何種檢查項目常用來偵測早期子宮頸癌、呼吸道癌症?※※A、組織切片檢查;※※B、超音波檢查;※※C、帕普試驗;※※D、核磁共振攝影。(《護理學》,98士檢)

【D】

先生今晨接受經皮穿刺的腎臟組織切片檢查,下列那一項反應表示陳先生對檢查後的注意事項能正確瞭解?※※A、「剛檢查完我最好臥床休息並避免用力」;※※B、「剛檢查完後少喝水以避免下床小便」;※※C、「出院後我最好不要活動,在家休息一週」;※※D、「休息三天後我就可以和我兒子踢足球了」。(97保甄)

【C】

腎臟組織切片檢查﹝RenalBiopsy﹞後的護理處置,下列何項不適當?※※A、穿刺部位加壓包紮;※※B、臥床休息24小時避免用力;※※C、限制飲水,以減輕腎臟負荷;※※D、保留每次所解小便以便評估。(《護理學》)

【C】

為確定癌症診斷及分期,最常用的是下列何種方法?※※A、電腦斷層攝影_;※※B、核磁共振攝影;※※C、活體組織切片;※※D、核子醫學檢查。﹝96士檢、專普,97專普﹞

【】

有關Wegener_granulomatosis何者錯誤?※※A、鼻部組織切片為_granulomata_that_are_caseating,with_loose_cellular_aggregates;※※B、用以診斷的triad為necrotizing_granulomatosis_of_the_upper_and_lower_respiratory_tract,antibodies_to_the_small_RNA-protein_complexes_Ro/SS-A_and_La/SS-B及_iritis;※※C、多發生在白人,男女發生率大致相同;※※D、血清學檢驗上c-ANCA為陽性,c-ANCA可用於監測病程進展。﹝耳鼻喉科,12年﹞

【D】

確定乳房腫塊性質最可靠的方法為:※※A、臨床表現;※※B、溢液塗片;※※C、乳房X線檢查;※※D、活組織切片檢查;※※E、B超斷層儀檢查。(《外科學》)

【A】

腎臟活體組織切片﹝Renal_Biopsy﹞檢查後之護理措施何者不適當:※※A、絕對臥床並以砂袋加壓至少2小時才可下床;※※B、檢查後6小時,若無出血現象,可協助下床解尿;※※C、鼓勵多喝水,以減少血塊生成,造成尿瀦留;※※D、檢查後1~2週內避免打籃球及提重物。(《護理學》)

 

 

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