組織學研究方法-幾種特殊顯微鏡的應用:

01、螢光顯微鏡﹝fluorescence_microscope﹞:

 螢光顯微鏡﹝fluorescence_microscope﹞是用來觀察標本中的自發螢光物質或以螢光素染色或標記的細胞和結構。

 螢光顯微鏡﹝fluorescence_microscope﹞是以高壓汞燈產生的短波紫外線為光源,並配有激發、阻斷、吸熱和吸收紫外線等濾片系統,標本中的螢光物質在紫外線激發下產生各種顏色的螢光,藉以研究該螢光物質在細胞和組織內的分佈。

 組織中的自發性螢光物質如神經細胞﹝nerve_cell﹞和心肌細胞等內的脂褐素﹝lipofuscin﹞呈棕黃色螢光,肝貯脂細胞和視網膜色素上皮細胞﹝myoepithelial_cell﹞內的維生素A呈綠色螢光,某些神經內分泌細胞和神經纖維﹝nerve_fiber﹞內的單胺類物質(兒茶酚胺﹝catecholamines,CA﹞、5-羥色胺﹝serotonin,5-HT﹞、組胺等)在甲醛作用下呈不同顏色的螢光,組織內含有的奎寧、四環素等藥物也呈現一定的螢光。

 細胞內的某些成分可與螢光素結合而顯螢光,如溴化乙錠與吖啶橙可與DNA綜合,進行細胞內DNA含量測定。

 螢光顯微鏡﹝fluorescence_microscope﹞更廣泛用於免疫細胞化學﹝immunocytochemistry﹞研究,即以異硫氰酸或羅丹明等螢光素標記抗體(一抗或二抗),用該標記抗體直接或間接地與細胞內的相應抗原結合,以檢測該抗原的存在與分佈。

02、相差顯微鏡﹝phase_contrast_microscope﹞:

 相差顯微鏡﹝phase_contrast_microscope﹞是用於觀察組織培養﹝tissue_culture﹞中活細胞形態結構的。

 活細胞無色透明,一般光鏡下不易分辨細胞輪廓及其結構。

 相差顯微鏡﹝phase_contrast_microscope﹞的特點是將活細胞不同厚度及細胞內各種結構對光產生的不同折射作用,轉換為光密度差異(明暗差),使鏡下結構反差明顯,影像清楚。

 組織培養﹝tissue_culture﹞研究常用的是倒置相差顯微鏡﹝inverted_phase_contrast_microscope﹞,它的光源和聚光器在載物台的上方,物鏡在載物台的下方,便於觀察貼附在培養器皿底壁上的活細胞。

03、暗視野顯微鏡﹝dark-field_microscope﹞:

 暗視野顯微鏡﹝dark-field_microscope﹞主要用於觀察因反差或分辨力不足的微小顆粒。

 此種顯微鏡主要是有一個暗視野﹝visual_field﹞集光器,使光線不直接進入物境,故呈暗視野﹝visual_field﹞。

 而標本內的小顆粒產生的衍射光或散射光進入物鏡,暗視野﹝visual_field﹞中的顆粒呈明亮小點,如同在暗室可見一束光線中的微小塵粒一般。

 普通通光鏡最大解析度為0.2μm,暗視野﹝visual_field﹞顯微鏡則可分辨0.004~0.2μm的微粒,適用於觀察細胞內線粒體運動及標本中細菌等微粒的運動等。

03、共焦鐳射掃描顯微鏡﹝confocal_laser_scanning_microscope,CLSM﹞:

 共焦鐳射掃描顯微鏡﹝confocal_laser_scanning_microscope,CLSM﹞是近10年研製成的高光敏度、高解析度的新型儀器。

 它以鐳射為光源,光束經聚焦後落在樣品(組織厚片或細胞)不同深度的微小一點,並作移動掃描,通過電信號彩色顯像,經過微機圖像分析系統進行二維和三維分析處理。

 CLSM可對細胞進行三維結構圖像分析,細胞內各種螢光標記物的微量分析,細胞內Ca2+、pH值等的動態分析測定,細胞的受體移動、膜電位變化、酶活性和物質轉運的測定,並以鐳射對細胞及其染色體進行切割、分離、篩選和克隆。

 因此,CLSM是一種高技術產品,可對細胞的多種功能進行全自動、高效、快速的微量定性和定量測定。

其他如偏光顯微鏡用於研究組織晶體物質及纖維等的光學性質,紫外光顯微鏡用於研究細胞內核酸的分佈與定量等。

 

經筋醫理探源(永康堂‧張老師)

 

 

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